Reagentes diversos de biomol

É uma solução balanceada com tripsina de origem suína isenta dos íons Cálcio e Magnésio. A concentração desta solução é 10X, necessitando ser diluída para concentração 1X no momento do uso. Em sua composição o EDTA atua como agente quelante, permitindo o "descolamento" das células de frascos de cultivo e/ou desagregando células entre si através de sua propriedade proteolítica sobre proteínas intercelulares, e ainda alterando a estabilidade das membranas ao quelar o íon cálcio.

• Tripsina, EDTA, HBSS modificado e bicarbonato de sódio,
• Aspecto: límpido e transparente
• pH: 7,0 + 0,2
• Armazenamento: Temperatura de -20ºC e descongelar apenas no momento de uso.

É uma solução balanceada que contém tripsina de origem suína isenta dos íons Cálcio e Magnésio, pronta para uso, diluída na concentração de uso direto. Em sua composição o EDTA atua como agente quelante, permitindo o "descolamento" das células de frascos de cultivo e/ou desagregando células entre si através de sua propriedade proteolítica sobre proteínas intercelulares, e ainda alterando a
estabilidade das membranas ao quelar o íon cálcio.

• Componentes: Tripsina, EDTA, HBSS modificado e bicarbonato de sódio,
• Aspecto: límpido e transparente
• pH: 7,0 + 0,2
• Armazenamento: Temperatura entre 2ºC a 8ºC

É uma solução balanceada com tripsina de origem suína isenta dos íons Cálcio e Magnésio. Ausente de Bicarbonato de sódio. O EDTA presente na formulação atua como agente quelante, permitindo o "descolamento" das células de frascos de cultivo e/ou desagregando células entre si através de sua propriedade proteolítica sobre proteínas intercelulares, e ainda alterando a estabilidade das membranas ao quelar o íon cálcio.

• Componentes: Tripsina, EDTA, HBSS modificado sem bicarbonato de sódio,
• Aspecto: límpido e transparente
• pH: 7,0 + 0,2
• Armazenamento: Temperatura de -20ºC e descongelar apenas no momento de uso.

O tampão TE é constituído pela mistura de 100 mL de solução de Tris-HCl (1M, pH: 9,0) / 20 mL de EDTA (0,5 M, pH: 9,0), em água tipo I. Esta solução precisa ser diluída 1:10 para seu uso direto. Esta solução não precisa ser autoclavada novamente, mesmo após ser aberta para uso repetido.
Tampão Tris-EDTA pH 9,0 (10X conc.) para recuperação antigênica induzida por calor. O tampão TE em pH 7,0 diminui a hidrólise das bases por quelação dos íons divalentes das preparações de RNA, devido à presença do EDTA, e por resistir às mudanças de temperatura com os
tampões contendo Tris. O tampão TE pH 8,0 pode ser utilizado para ressuspender pellets de DNA. Se ocorrer formação de precipitado, aquecer a solução a 37°C por curto espaço de tempo, isto não irá alterar a qualidade do tampão.

• Composição: 1,0 M de Tris base, pH 9.0 com HCl, 0,5 M EDTA
• pH final do tampão pH: 9,0
• Armazenamento e transporte: Temperatura ambiente.

O PBS (Phosphate-Buffered Saline) é um reagente muito utilizado em laboratórios, ele pode ser adaptado para as mais diversas aplicações. Dependendo da aplicação, algumas vezes é necessária a suplementação do Tampão PBS com cátions divalentes como CaCl2 e MgCl2. O Tampão PBS tem pH 7,4, é preparado com reagentes de elevada qualidade, e filtrado em membrana de 0,1 µm. Para controle de qualidade os testes incluem Endotoxina, Mycoplasma, ausência de contaminação por fungos/bactérias. O Tampão PBS é indicado para os trabalhos com proteínas, células e tecidos. Para uso e aplicações este tampão poderá ser usado diretamente. O tampão pode ser ainda acrescido de Azida Sódica 0,2 g/L.

• Composição: NaCl KCl, Na2HPO4, KH2PO4
• Armazenamento: Temperatura ambiente entre 10ºC a 30ºC
• Transporte: Transportado em temperatura ambiente entre 10ºC a 30ºC

O PBS (Phosphate-Buffered Saline) Modificado é um reagente muito utilizado em laboratórios, ele pode ser adaptado para as mais diversas aplicações. Dependendo da aplicação, algumas vezes é necessária a suplementação do Tampão PBS com cátions divalentes como CaCl2 e MgCl2. O Tampão PBS 1X Modificado é indicado para os trabalhos com proteínas, células e tecidos. Quando suplementado com HEPES pode ser utilizado em protocolos de lavagem e manutenção de linhagens celulares. Para uso e aplicações este tampão poderá ser usado diretamente. O tampão pode ser ainda acrescido de Azida Sódica 0,2 g/L.

• Componentes: NaCl KCl, Na2HPO4, KH2PO4, HEPES
• Armazenamento e transporte: O PBS 1X Modificado pode ser transportado e armazenado em temperatura ambiente entre 10° a 30°C e são estáveis até a data de validade descrita na embalagem. 

O Tampão Salina-Fosfato é indicado para os trabalhos com proteínas, células e tecidos. O tampão é preparado com reagentes de elevada qualidade e filtrado em membrana de 0,22 µm. Dependendo da aplicação, algumas vezes é necessária a suplementação do tampão PBS com cátions
divalentes como CaCl2 e MgCl2. O tampão apresenta pH: 7,2 e pode ser ainda acrescido de Azida Sódica 0,2 g/L. Este produto é de uso EXCLUSIVO PARA DIAGNÓSTICO IN VITRO. 

• Composição do kit: 137 mM NaCl - 8,0 g, 2,7 mM KCl - 0,2 g, 10 mM Na2HPO4 anidro - 1,189 g, 2 mM KH2PO4 - 0,2 g, Água destilada q.s.p. - 1,0 L e pH para uso geral: 7,2 - 7,4
• Armazenamento: Temperatura ambiente. Após aberto armazenar entre 2°C e 8°C por 12 meses.
• Transporte: Temperatura ambiente.

O Tampão TE 10X é constituído pela mistura de solução de Tris-HCl (100mM, pH: 8,0) e EDTA (10mM, pH: 8,0), em água tipo I. A solução é livre de DNAse/RNAse. Esta solução precisa ser diluída 10 vezes para uso direto na concentração 1X. O Tampão TE 10X em pH 8,0 diminui a hidrólise das bases por quelação dos íons divalentes das preparações de RNA, devido à presença do EDTA, e por resistir às mudanças de temperatura com os tampões contendo Tris.

• Composição: Tris-HCl 100mM pH 8,0, EDTA 10mM pH 8,0
• pH final do tampão 8,0
• Armazenamento e transporte: O Tampão TE 10X pH 8,0 pode ser transportado e armazenado em temperatura ambiente entre 10° a 30°C e são estáveis até a data de validade descrita na embalagem. 

O soro Fetal Bovino Estéril (SFB), tripla filtração 0,1 micra BioPlus da Nova Biotecnologia é a fração líquida do sangue de feto bovino, sem células, fibrina e fatores de coagulação, porém contendo uma grande quantidade de fatores nutricionais e macromoleculares essenciais para o crescimento celular. O SFB BioPlus da Nova Biotecnologia apresenta resultados excepcionais nos meios de cultivo celular suplementados com este produto. Os fatores de crescimento que o SFB contém, aliados aos fatores da suplementação com o SFB BioPlus conferem ao meio de cultivo celular uma riqueza de componentes que resultam numa melhora e rendimento otimizado das células em crescimento. O SFB BioPlus deve ser utilizado em culturas celulares eucarióticos e possui ampla aplicação em pesquisa, na manufatura e controle de vacinas e fármacos biotecnológicos de uso humano e animal, em geral.

Armazenamento: Temperatura de -20ºC

O uso de antibióticos em meios para cultivo celular é considerada uma medida adicional de segurança, e não um método de esterilização de meio de cultura. Assim, se as condições de assepsia forem perfeitas o seu uso não é aconselhado. Quando se trabalha com culturas celulares de curta duração, como é o caso daquelas para obtenção de metáfases do sangue periférico ou de medula, ou mesmo de embriões, os antibióticos podem ser utilizados visando evitar as eventuais contaminações pela manipulação externa ao fluxo laminar. Deve-se sempre levar em conta dois fatores: o grau de cito toxidade do antibiótico e a resposta celular ao mesmo, uma vez que a interação entre ambas é muito variada.

Armazenamento: Temperatura de -20ºC

Antimicôtico de uso em cultivo celular Anfotericina B, muitas vezes referida como Fungizona. O uso normal é de 2,5 mg/L junto com a adição de penicilina e estreptomicina ao meio. Recomenda-se usar o produto em volume de 10 mL/L de meio. Anfotericina B é estável em cultura a 37°C até 3 dias. Para matar leveduras e fungos, recomenda-se que use este produto a 2–4 vezes o nível normal (20–40 mL/L) em meio sem penicilina e estreptomicina, por 2 a 3 subculturas. Então, retorne as células para condições medias normais.

Armazenamento: Temperatura de –20°C
 

Antimicôtico de uso em cultivo celular Anfotericina B, muitas vezes referida como Fungizona. O uso normal é de 2,5 mg/L junto com a adição de penicilina e estreptomicina ao meio. Recomenda-se usar o produto em volume de 10 mL/L de meio. Anfotericina B é estável em cultura a 37°C até 3 dias. Para matar leveduras e fungos, recomenda-se que use este produto a 2–4 vezes o nível normal (20–40 mL/L) em meio sem penicilina e estreptomicina, por 2 a 3 subculturas. Então, retorne as células para condições medias normais.

Armazenamento: Temperatura de –20°C

O Trypan Blue é um corante vital. A reatividade deste se baseia no fato do cromóforo ser negativamente carregado e não interagir com as células a menos que a membrana esteja danificada. Assim as células que excluem o corante são teoricamente viáveis. 

Armazenamento: Temperatura entre 2ºC a 8ºC

A solução de penicilina-estreptomicina bactérias, anfotericina B é utilizada para suplementar os meios de cultura de células, sendo assim eficiente contra gram-positivas e gram-negativas, e fungos. Esta solução antibiótica/antimicótica é composta de penicilina (10.000 UI/mL), estreptomicina (10mg/mL)
e anfotericina-B (25ug/mL). 

Armazenamento: Temperatura de -20ºC.

A Sacarose é um dissacarídeo composto por uma molécula de glicose e uma de frutose. Todas as plantas produzem sacarose pela fotossíntese, um processo natural que transforma a luz do sol em energia vital. Mas apenas a cana-de-açúcar e a beterraba produzem sacarose suficiente para a produção industrial, gerando o mesmo resultado: açúcar puro. Sacarose, mais comumente chamada de açúcar, é somente um dos vários adoçantes naturais encontrados nas plantas utilizadas como alimento, e que fazem parte de um grande grupo de substâncias chamadas de carboidratos. Produto classificado como reagente analítico, uso em laboratório de controle de qualidade. utilizada na preparação de meios de cultura microbiológicos em ambiente de laboratório. Não se destina ao uso em diagnóstico.

Composição: PM 342.30, C12H22O11
Armazenamento e transporte: A Sacarose pode ser transportado e armazenado em temperatura ambiente entre 10° a 30°C e são estáveis até a data de validade descrita na embalagem. 

O meio RPMI-1640 foi desenvolvido por Moore e colis (1969), no Roswell Park Memorial Institute. A sua formulação é baseada no meio RPMI-1630, e utiliza um sistema de tamponamento com bicarbonato e concentrações modificadas de aminoácidos essenciais e vitaminas para estimular o crescimento celular. O meio RPMI-1640 tem sido utilizado na cultura de células humanas normais bem como de células neoplásicas (provenientes de tecidos tumorais).
Quando devidamente suplementado, o meio demonstra enorme aplicabilidade, pois suporta o crescimento de diversos tipos de cultivos celulares, incluindo linfócitos humanos frescos, para ensaios de estimulação em 72 horas com fitohemaglutinina (PHA). Para evitar o estresse oxidativa, a maioria das células cultivadas utiliza um sistema de defesa antioxidante, no entanto; certos tipos de células são incapazes de fazer isto apenas com sua maquinaria genética e, assim, a adição de beta-mercaptoetanol auxilia na manutenção de um ambiente redutor. Por exemplo, as
linhas celulares de insulinoma requerem beta-ercaptoetanol para seu crescimento uma vez que aglutationa é altamente oxidada.

• Solução cristalina na concentração de uso (1X)
• pH a 25°C (com NaHCO3): 7,2 +/- 0,2
• Osmolaridade (com NaHCO3): 295 +/- 5%. 
• Armazenamento: Temperatura entre 2ºC e 8ºC

O meio RPMI-1640 foi desenvolvido por Moore e cols. (1969) no Roswell Park Memorial Institute. A sua formulação é baseada no meio RPMI-1630, e utiliza um sistema de tamponamento com bicarbonato e concentrações modificadas de aminoácidos essenciais e vitaminas para estimular o crescimento celular. Foi demonstrado que o RPMI 1640 suporta várias linhas celulares dependentes de ancoragem e também tem sido utilizado em protocolos de fusão e no crescimento de células híbridas. O RPMI 1640 Modificado com HEPES contém HEPES 25 mM para fornecer capacidade adicional de buffer ao meio. Um tampão zwitteriônica, HEPES tem um pKa de 7,3 a 37° C, que é mais compatível com a maioria dos sistemas de cultura do que o de bicarbonato de sódio, que é geralmente 6,2 sob condições semelhantes. O HEPES reduz as mudanças súbitas e drásticas do pH, mas, como acontece com outros
tampões, não impedirá totalmente a mudança do pH.

Armazenamento: Protegido da luz em temperatura entre 2 e 8° C. Não congele. Não use após a data de validade.

O meio RPMI-1640 foi desenvolvido por Moore e cols. (1969) no Roswell Park Memorial Institute. A sua formulação é baseada no meio RPMI-1630, e utiliza um sistema de tamponamento com bicarbonato e concentrações modificadas de aminoácidos essenciais e vitaminas para estimular o crescimento celular. O meio RPMI-1640 tem sido utilizado na cultura de células humanas normais bem como de células neoplásicas (provenientes de tecidos tumorais). Quando devidamente suplementado, o meio demonstra
enorme aplicabilidade, pois suporta o crescimento de diversos tipos de cultivos celulares, incluindo linfócitos humanos frescos, para ensaios de estimulação em 72 horas com fitohemaglutinina (PHA).

Armazenamento: Temperatura entre 2ºC e 8ºC.

O meio RPMI-1640 foi desenvolvido por Moore e cols. (1969) no Roswell Park Memorial Institute. A sua formulação é baseada no meio RPMI-1630 e utiliza um sistema de tamponamento com bicarbonato e concentrações modificadas de aminoácidos essenciais e vitaminas para estimular o crescimento celular. O meio RPMI-1640 tem sido utilizado na cultura de células humanas normais bem como de células neoplásicas (provenientes de tecidos tumorais).
Quando devidamente suplementado, o meio demonstra enorme aplicabilidade, pois suporta o crescimento de diversos tipos de cultivos celulares, incluindo linfócitos humanos frescos, para ensaios de estimulação em 72 horas com fito hemaglutinina (PHA).

Armazenamento: Temperatura entre 2ºC e 8ºC.

O Reagente de Bradford deve ser usado para determinar a concentração de proteínas em solução. O
procedimento é baseado na formação de um complexo entre o corante, Brilliant Blue G, e proteínas em
solução. O complexo formado entre a proteína e o corante provoca uma mudança na absorção máxima
nas leituras entre 465 e 595nm. O valor de absorção é proporcional à concentração de proteína
presente. O Reagente de Bradford não requer diluição e é ideal para microensaios, multiensaios e
ensaios padrões. A linearidade do ensaio é de 0,05-1,4 mg/mL (50-1.400mg/mL)de proteína, usando BSA (albumina bovina sérica) como proteína padrão. O Reagente de Bradford é compatível com agentes redutores, que são comuns para estabilização de proteínas em solução. Outros ensaios para quantificação de proteínas (Lowry e BCA) não são compatíveis com tais agentes. O Reagente de Bradford deve ser utilizado no lugar destes ensaios se agentes redutores estiverem presentes. Entretanto, o Reagente de Bradford só é compatível com concentrações baixas de detergentes (vide tabela de compatibilidade). Se a amostra de proteína a ser utilizada possui detergente presente no tampão, sugere-se a determinação através do ensaio de BCA.

Armazenamento: Temperatura entre 2°C e 8°C e é estável por 1 ano. A BSA reconstituída é estável por 60 dias entre 2°C e 8°C ou 6 meses entre -20°C a -70°C.

É uma mistura de sais enriquecidos com aminoácidos, vitaminas e outros componentes essenciais para o crescimento celular. Testado em pelo menos três linhagens celulares diferentes, além do cultivo de linfócitos, sendo sempre determinado o seu pH e osmolaridade.

• Solução cristalina rósea
• pH a 25ºC (com NaHCO3): 7,7 + 0,25
• Osmolaridade (com NaHCO3): 297 + 5%
• Armazenamento: Temperatura entre 2ºC a 8ºC

O DPBS Dulbecco's Phosphate Buffered Saline, sem Cloreto de cálcio e sem Magnésio, sem bicarbonato de sódio, líquido, filtrado, adequado para cultura de células. O DPBS tem pH 7,2, é preparado com reagentes de elevada qualidade, e filtrado em membrana de 0,1 micra. Para controle de qualidade os testes incluem Endotoxina, Mycoplasma, ausência de contaminação por fungos/bactérias.

Componentes: NaCl, KCl, Na2HPO4, KH2PO4
Armazenamento e transporte: Pode ser transportado e armazenado em temperatura ambiente entre 10° a 30°C e são estáveis até a data de validade descrita na embalagem. 

Este meio de cultura é basicamente uma modificação do Eagle's Basal Medium (BME). O meio Dulbecco’s MEM inclui concentrações de aminoácidos maiores que o BME assemelhando-se às concentrações protéicas das células de mamíferos. O meio DMEM tem sido utilizado na cultura de grande variedade de células de crescimento em monocamada. A suplementação adicional de aminoácidos não-essenciais (meio de Hank’s ou sais de Eagle’s) tem tornado o meio de maior utilidade. Na fórmula modificada, a eliminação do cálcio possibilita o crescimento de células em suspensão.

• Solução cristalina de cor avermelhada
• pH a 25oC (com NaHCO3): 7,7 + 0,5
• Osmolaridade (com NaHCO3): 310 + 5
• Armazenamento: Temperatura entre 2ºC e 8ºC

Caldo base TAT (Triptose, Azolectina, Tween) com adiçãi de Polisorbato 20 é usado para teste de esterilidade de substâncias altamente gelatinosas ou viscosas como pomadas.